教学片：如何用快速检测试纸条检测Bt（Cry1Ab/1Ac）转基因水稻

视频地址：http://www.56.com/u32/v_NTgwODM0NTM.html

 

 

 

基本常识

§  目前获得转基因生物安全证书的两种转基因水稻（“华恢1号”和“Bt汕优63”）都能够产生两种蛋白质Cry1Ac和Cry1Ab，在快速检测过程中，样本中只要有两种中的任何一种蛋白质，试纸条就会显示阳性。

§  此快速检测试纸条只能检测Cry1Ac和Cry1Ab两种蛋白质，即使样本是其他的转基因品种，但是不能产生这两种蛋白质的话，快速检测试纸条也没有作用。

§  所以，此试纸条不能检测转基因大豆，需要用专门的检测试纸条。

检测步骤

1.     准备样本

2.     配制蛋白质提取液

3.     提取蛋白质

4.     快速检测

5.     结果分析

1.准备样品

§  将可疑的大米、稻种（去壳，约10-20粒）磨碎，尽量达到粉末状。如果是水稻叶片（约3-4片），需捣碎至泥浆状。

2.配制蛋白质提取液

§  将检测用的粉末和纯净水以1：10的比例（体积比）混合，充分摇匀备用（约3分钟）。

§  容器可以选择10ml的塑料密封管。

§  配制完成后常温保存，当日配当日用。

3.提取蛋白质

§  将磨碎的样本和提取液以1：4的比例（体积比）混合，充分摇匀（约1-2分钟），混合均匀后静置备用。

§  容器可以选择1.5ml的塑料密封管。

4.快速检测

§  保持垂直方向将检测试纸条上标有“sample”的一端浸入样品提取液中。试纸条浸入样品提取液的部分不要超过0.5cm。在整个检测过 程中要保持试纸条始终浸在样品提取液中（3-5分钟即可）。

5.结果分析

§  质控线一般会在3—5分钟内出现。最长的反应时间为20分钟，在这段时间里最好将试纸条从样品提取液中取出。如果质控线没有出现，那么本次检测失败。

§  测试线显现，说明样品为阳性。

§  测试线不显现，说明样品为阴性。

§  测试线的颜色变化与质控线的颜色变化一样，都是由红变紫。

§  检测试纸条需保存于4度低温条件，如在野外条件艰苦，尽量避免暴露在高温下。

 

  

§  购买试纸

§  北京博欧实德生物技术有限公司
地址：北京朝阳区北苑路奥运媒体村天畅园1号楼C1-2006室[100107]

§   

§  http://www.instrument.com.cn/netshow/SH101701/office.asp

注：本片所述试纸仅能够检测含有Cry1Ab/1Ac转基因成分的转基因水稻，转基因大豆种子检测纸条须另外购买，详情可咨询北京博欧实德生物技术有限公司。
 

附：快速检测试纸条法在大豆转基因检测中的应用

来源：上海农业网

        转基因食品的安全问题，特别是转基因食品对人及动物的健康，以及对生态环境的影响，一直是人们关注的焦点。2008年中国从美洲进口3000多万吨转基因大豆，出口欧美等国家40多万吨非转基因大豆，2009年一季度我国大豆的进出口量呈递增趋势，为加强大豆产品的食品安全管理，需要检验机构对其进行有效监控。

国内外转基因检测主要有三种方法，第一种是以核酸为基础的PCR检测方法，包括定性PCR、实时荧光定量PCR、PCR-ELISA半定量和基因芯片等方法；第二种是检测外源基因的表达产物一蛋白质检测方法，分为试纸条、ELISA和蛋白芯片三种方法；第三种是利用红外检测转基因产品化学及空间结构。以核酸为基础的PCR检测方法，是目前国内外检测生物技术产品最常用的方法，PCR方法具有准确、检测限低、适用范围广的特点，但需要的仪器设备昂贵，检测周期较长，因此需要一种快速检测方法来充实，满足大豆产品在种植、加工及贸易中的监控需要。目前，快速检测试纸条法能较好地对大豆产品进行检测，且检测结果准确、速度快、成本低，适合快速检测的需要。

快速检测试纸条法应用了双抗体夹心法，首先将CP4 EPSPS蛋白特异的抗体，偶连于显色试剂，并参入试纸条。当试纸条被插入含有CP4 EPSPS蛋白的植物组织的小量萃取物时，偶连抗体与蛋白之间就发生了结合，与偶连于显色试剂上的某些但不是全部抗体形成夹心物。膜片含有两个捕获区，一个捕获区可捕获结合的CP4 EPSPS蛋白，另一个捕获区可捕获显色试剂。当夹心物和未反应的显色试剂被膜片上的特定区捕获时，这些捕获区就显现出红色。若膜片上仅存在一条红色对照线，便说明受检样品为阴性样品，若存在两条线，便说明受检样品为阳性样品。

文章采用快速检测试纸条法与PCR方法，分别检测阴性大豆、不同国家阳性大豆、不同转基因含量的阳性大豆，比较两种方法检测结果的一致性，并对快速检测试纸条检测限进行评定，分析快速检测试纸条在大豆转基因检测中应用的可能性。

1材料与方法1.1材料及试剂    东北大豆；美国进口大豆；巴西进口大豆；阿根

廷进口大豆；无水乙醇：分析纯，市售；快速检测试纸条：美国SDI公司；量筒：100 mL’分度值1mL;锥形瓶：250 mL;一次性样品管：1.5 mL;一次性移液吸管：0.5 mL; GB/T19495.4- 2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》中所用材料与试剂。

1.2仪器

天平：Mettler Toledo PB1502 - S/A，感量0.01 g，瑞士；实验磨：备有筛孔孔径为2.0mm的筛网，上海嘉定；PCR仪：PCR System 9700，美国；电泳仪：A- gageln mini，美国；凝胶成像仪：Uvitec，美国。

1.3测定方法

1.3.1 PCR法按GB/T19495.4 - 2004执行。

1.3.2快速检测试纸条法

(1)用实验磨将样品粉碎至90%以上通过2.0 mm筛网，称取约30 9试样于250mL锥形瓶中，加水100 mL，剧烈震荡20s，静置20 s。

(2)用一次性移液吸管吸取提取液0.5mL于一次性样品管中。

(3)将一条转基因快速检测试纸条插入样品管提取液中，静置5 min。

(4)试纸条上结果窗上出现一条红线证明为阴性大豆，出现两条红线为阳性大豆。

2结果与讨论

2.1两种方法测定阴性大豆的结果比较

用PGR法及快速检测试纸条法对东北大豆进行转基因测试，结果见表1。

结果表明，两种方法对阴性大豆进行转基因检测，可以取得相同的结果。

2.2两种方法测定阳性大豆的结果比较

用PCR法及快速检测试纸条法对进口大豆进行转基因测试，结果见表2~表4。

结果表明，两种方法对美国、巴西、阿根廷大豆进行转基因检测，结果均为阳性，可以取得相同的结果。

2.3不同转基因含量大豆的结果比较

将进口阳性大豆与国产阴性大豆按不同质量比进行混合，用快速检测试纸条法测定转基因含量，结果见表5。

结果表明，不同转基因含量的阳性大豆，用快速检测试纸条法进行检测，可以取得阳性检测结果，方法判定准确。

2.4检测限的确定

取转基因大豆与非转基因大豆按质量百分比进行混合，确定其检出限，结果表明快速检测试纸条法检出限可以达到0.1%。

3结论

采用快速检测试纸条法测定大豆转基因含量，测定时间仅需10 min，测定结果准确，与传统PCR方法相比，缩短了工作时间，提高了工作效率，节约了检测成本，检测材料对环境没有污染，可以推广使用。

丁耀魁，沈娟，马黎黎

（中国华粮物流集团北良有限公司，辽宁大连  116001）

粮油食品科技2010.2

江洪涛采集审核；程彬彬编辑上传。